CAR分子設計とレンチウイルス調製

CAR分子設計

ベクター構築

CAR分子を設計した後、通常は合成し、図に示すようにレンチウイルスシャトルプラスミドにサブクローニングして、CAR発現ベクターを生成します。さらに、サイヤジェンは、ヒトCD19、BCMA、GPC3、FAP、HER2、およびその他の抗原を標的としたさまざまなCARレンチウイルスプラスミドを在庫として提供しており、これらは常に更新および拡張されています。

図2.CARレンチウイルスベクターの構造

ウイルスのパッケージングと精製

サイヤジェンは、レンチウイルスベクターの調製において豊富な経験を持ち、多様なレンチウイルス調製サービスを提供しています。安全性の高い第3世代のレンチウイルスパッケージングシステムを使用し、サイヤジェンは図4に示す調製プロセスに従っています。

図3.レンチウイルスパッケージング技術ルート

提供するサービス：

• CAR分子設計、ベクター構築
• CARレンチウイルスの製造
• 標的抗原発現のための安定した細胞株構築

成果物：

• ベクター構築レポート
• レンチウイルスの品質管理レポート
• 濃縮レンチウイルス

お客様からご提供いただくもの：

• 標的抗原情報
• 抗体scFv配列（オプション）
• CAR分子構造情報
• 必要なベクター情報

サイヤジェンが選ばれる理由

• CAR分子設計における業界をリードする専門知識で、包括的かつカスタマイズされたソリューションを提供
• CARレンチウイルスベクターの堅牢なライブラリで、迅速かつ最高品質のサービスを提供
• 専門的な安定した細胞株構築サービスにより、高レベルの抗原発現と安定性を保証
• 高効率なレンチウイルス製造プロセスにより、高力価・高純度の製品を確保
• 厳格な品質管理基準により、最高レベルの品質と信頼性を保証

研究事例

• CD19抗原レンチウイルスの力価検出

精製したCD19抗原を発現するレンチウイルスを勾配希釈（0.01、0.1、1、10μLの4段階）し、等量の293T細胞に添加しました。72時間後、フローサイトメトリーによりレンチウイルス感染陽性293T細胞の割合（すなわち、全細胞数のうちレンチウイルス感染293T細胞の割合）を求め、レンチウイルスの導入価を算出しました。

図4.CD19抗原に対するレンチウイルスの滴定結果

図に示すように、CD19抗原陽性細胞数は、ウイルス導入勾配の増加とともに徐々に増加し、レンチウイルスが良好な感染性を有することが示されました。なお、ウイルス力価は1.4×10⁸TU/mLと算出されました。

• CD19-293T安定細胞株の構築

前述のCD19抗原レンチウイルスを用いて293T細胞を導入したところ、複数回のスクリーニングを経て、CD19抗原を高発現する均質性の高いCD19-293T安定細胞株を得ることができました。

図5.CD19-293T細胞におけるCD19抗原陽性率検出結果

• FMC63 CARレンチウイルスの滴定

CD19抗原を標的とするFMC63 CAR分子を以下の構造で設計し、レンチウイルス調製用ベクター上に構築しました。FMC63 CARのレンチウイルス力価を前述の方法で検出したところ、4.33 × 10⁸ TU/mLであることが判明されました。

図6.FMC63 CARの分子構造

図7.FMC63 CARのレンチウイルス滴定結果