コンディショナル遺伝子ターゲティングはある遺伝子の修飾を特定種類の細胞やマウス発育の特定段階に限定された特殊な遺伝子ターゲティング方法である。現在、コンディショナル遺伝子ターゲティングは主に大腸菌P1バクテリオファージから由来したCre-LoxPシステムを使用している。Cre-LoxPシステムを利用して目的遺伝子のポジショニングノックイン、ノックアウト、リコンビナーゼ媒介の箱式交換などの多種類の遺伝子工学操作が実現できる。
Cre-LoxPシステムの動作原理
Creタンパク質は大腸菌ターゲティングP1に存在するリコンビナーゼであり、細胞内遺伝子またはDNAのLoxPシーケンスを特異的に識別し、LoxPシーケンスの位置とLoxPシーケンスとの関係に基づいて、異なる特異的組換反応を介することができる。
コンディショナル遺伝子ノックアウトの基本原理が利用した組換方式は、二つのLoxP部位が一つのDNAチェーンに位置し、且つ同じ方向であれば、Creリコンビナーゼが二つのLoxPサイトの間のシーケンスを効果的にノックアウトすることができる(図A)。
Cre-loxPが遺伝子組み換えを誘導する方式である。ノックアウト(A)、反転(B)、転座(C)
コンディショナル遺伝子ノックアウトマウスを調製するのにFloxedマウス(即ち目的遺伝子がLoxPシーケンスでアンカーされたマウス)とCreマウスの2種類のマウスが必要である。Creマウスとは、即ちCreリコンビナーゼがマウスの特定組織または細胞で発現するマウスである。そのCre遺伝子の発現は一つの特異性プロモーターに制御され、このプロモーターがCre発現の組織や細胞のタイプを決定する。Cre遺伝子を配位子または薬物誘導可能なプロモーターの制御に同時に置くと、Cre発現に対する時間と空間レベルの正確な調整が同時に実現できる。
サイヤジェン株式会社のCreマウスプラットフォーム
研究者様がコンディショナルノックアウト(cKO)とコンディショナルノックイン(cKI)ラットマウスモデルを開発される時、1つの主な制限は目標標的に対するCre品系の不足です。ラットに関する設備が高いため、任意の品系のCre-loxラットの作製もすぐコストまたはスペース制限に直面します。この問題を解決するために、サイヤジェンがCreモデルライブラリを設立しています。各種類のラットマウス品系が含まれ、全世界の研究者様にご提供いたします。
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サイヤジェン株式会社について
サイヤジェン株式会社は15年間の発展を経て、全世界の数万人の科学研究者にサービスを提供しており、製品と技術は直接にCNS (Cell、Nature、Science)の定期刊を含む5,200余りの学術論文に応用されています。弊社の「ノックアウトマウスライブラリ」は低価格だけでなく、遺伝子名称を入力すれば、ワンクリックで注文まで操作できます。 ノックアウトマウス、ノックインマウス、コンディショナルノックアウトマウス、トランスジェニックマウス、GFPマウス、免疫不全マウス、無菌マウスなどのカスタマイズサービスを提供する以外、専門的な手術疾患モデルチームがあり、多種の複雑な小動物手術疾患モデルも提供できます。