● モデル作製：

モデル名：ACE2-KO
バックグラウンド系統C57BL/6J

● IHC-P バリデーション：

モデル確立後、マウスの異なる組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、免疫組織化学実験により評価した。腸、肺、肝臓、脳、気管、腎臓、胃、心臓で陰性であったことから、ノックアウトマウスで測定可能なACE2の発現がないことが確認され、KOモデル作製に成功したことが示された。

● C57BL/6J 陰性対照：

C57BL/6Jマウスの組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、免疫組織化学実験により評価した。その結果、腸、肺、肝臓、脳、気管、腎臓、胃、心臓で陰性であったことが報告された。

● モデル作製：

モデル名：H11-ACE2-KI
バックグラウンド系統C57BL/6J
構築戦略：ヒトのシグナルペプチド、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメインをマウスH11遺伝子座に挿入
マウスH11遺伝子座にヒトシグナルペプチド、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメインを挿入。

● IHC-P バリデーション:

モデル確立後、マウスの異なる組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、免疫組織化学実験により評価した。その結果、腸、肺、肝臓、脳、気管、腎臓、胃、心臓で異なるレベルのACE2発現を示したが、K18プロモータは依然として非特異的に発現しており、異なる実験の必要性に応じた選択が可能であることが判明された。

● C57BL/6J 空白対照:

C57BL/6J 空白対照マウスの組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、免疫組織化学実験により評価した。その結果、腸、肺、肝臓、脳、気管、腎臓、胃、心臓で陰性であることが報告された。

* このモデルに関する資料はこちらをご覧ください。

● モデル作製:

モデル名：ACE2-KI
バックグラウンド系統C57BL/6J
構築戦略：マウスのシグナルペプチドと内在性PolyAを保持し、マウスAce2の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメインをヒトACE2のものに置換。

● qPCRバリデーション：

モデル確立後、マウスの異なる組織を採取し、qPCRバリデーションを行った。その結果、小腸、大腸、腎臓、肺、気管でhACE2が発現しており、ヒトACE2遺伝子の転写産物の発現に成功し、遺伝子レベルでヒト化モデルの検証ができた。

● IHC-P バリデーション：

モデル確立後、マウスの異なる組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、免疫組織化学実験を行った。その結果、腸、腎臓、肺、気管にhACE2タンパク質が発現しており、ヒト化モデルがヒトACE2タンパク質を正常に発現できることが確認され、モデル検証は成功した。

● C57BL/6J 空白対照：

C57BL/6J 空白対照マウスの組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋後、免疫組織化学実験により評価した。その結果、腸、肺、肝臓、脳、気管、腎臓、胃、心臓で陰性であることが報告された。

● WBバリデーション： 臓器による発現の違い:

大腸、小腸、腎臓、脳、気管、肺の6組織を別々に検査。ヒトACE2の理論上のバンドサイズは92KDであり、 タンパク質のグリコシル化修飾により、タンパク質自体が大きすぎる可能性がある。