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CRISPR-Cas9ノックアウト/ノックインマウス・ラット作製サービス

CRISPR/Cas9ノックアウト・ノックインマウス/ラット
CRISPR-Cas9の仕組み:

CRISPR-Cas9システムは、切断したい標的塩基配列をターゲットするguide RNA とCas9タンパク質により、ターゲット遺伝子上のDNAを修飾できる新しい技術です。このシステムでは、crRNA (CRISPR-derived RNA) とtracrRNA (trans-activating RNA) が二本鎖RNAとなります。そして、Cas9タンパク質がこの複合体のターゲット配列を認識し、二本鎖DNAを切断し、DNAゲノムの修飾を行います。マウスゲノムとラットゲノムの特定部位への精密な修飾ができ、KO/KIモデルマウス・ラット作製に応用されています。

CRISPR-Cas9サービスの流れ:

CRISPR-Cas9技術の特徴:
  1. 標的遺伝子における複数の部位や遺伝子を同時にノックアウトできる
  2. 作製時間の短さ、価格の低さ
  3. マウス・ラットに応用可能(動物の種類での制限がない)
系統樹立:
  1. CRISPR-Cas9技術は、マウス・ラットの受精卵前核期に編集を行うため、作製したF0はヘテロ接合型になります。また、個体によってF0の変異状況が異なる可能性があるため、個々のF0を1種の独立した系統として扱います。
  2. 前核マイクロインジェクション法により作製したF0ヘテロマウス・ラットは、シークエンシングにより陽性ファウンダーを選別します。陽性F0を野生型マウス・ラットと交配させ、シークエンシングにより陽性F1ヘテロ接合体を選別します。(F1の突然変異型が異なる可能性があります。)

  3. 同じF0から由来する突然変異型も、一致するF1マウス・ラットを性成熟後に交配させ、F2マウス・ラットを作製します。そのF2マウス・ラットに、PCR及びシークエンシングにより検定します。理論上、F2マウス・ラットでは、25%がホモ接合型、50%がヘテロ接合型、25%が野生型になります。

参考価格および標準納品期間:

マウス

No. 作業内容 期間 価格(税別)
1

gRNAデザイン、Cas9発現ベクター作製 (KO) 3-5週 500,000円
gRNAデザイン、Cas9発現ベクター作製 (KI) 3-5週 700,000円
2

受精卵 (C57BL/6N) 200-400個へのインジェクション (KO) 2週 700,000円
受精卵 (C57BL/6N) 200-400個へのインジェクション (KI) 2週 1,200,000円
3

F0、F1マウス作製、ジェノタイピング実施 (KO) 14-20週 300,000円
F0、F1マウス作製、ジェノタイピング実施 (KI) 16-24週 300,000円
4 納品にかかる輸送費、微生物検査費 別途お見積もり
合計 KO 19-27週 1,500,000円
KI 21-31週 2,200,000円
オプション オフターゲット効果分析 1-2週 13,000円/サイト

ラット

No. 作業内容 期間 価格(税別)
1

gRNAデザイン、Cas9発現ベクター作製 (KO) 3-5週 500,000円
gRNAデザイン、Cas9発現ベクター作製 (KI) 3-5週 700,000円
2

受精卵 (SD) 200-400個へのインジェクション (KO) 2週 1,400,000円
受精卵 (SD) 200-400個へのインジェクション (KI) 2週 1,900,000円
3

F0、F1ラット作製、ジェノタイピング実施 (KO) 14-20週 600,000円
F0、F1ラット作製、ジェノタイピング実施 (KI) 16-24週 600,000円
4 納品にかかる輸送費、微生物検査費 別途お見積もり
合計

KO 19-27週 2,500,000円
KI 21-31週 3,200,000円
オプション オフターゲット効果分析 1-2週 13,000円/サイト