遺伝子編集に対する経験の浅い研究者は、ノックアウト断片が大きいほど良いと勘違いしているでしょうか？遺伝子ノックアウトマウスを作製の目的はある特定の遺伝子を排除させ、できるだけほかの遺伝子の機能を妨害しないようにすることで、目的遺伝子の機能と表現型に焦点を合わせて研究することができる。周知のように、遺伝子配列がエクソン(exon)とイントロン(intron)から構成される。エクソンが転写された後に成熟なmRNAに加工され、機能のあるDNA配列と認められる。イントロンはRNA転写後に加工過程が剪断されて、無機能のDNA配列と認められる。ただし、あるイントロンが全く無機能ではなく、当該遺伝子或いは他の遺伝子の発現調整に参加するかもしれない。コンディショナルノックアウト(CKO)を行う時、LOXPなどの外来配列はイントロン安全区域に挿入した(AIはすでにSAとSD区域を避けたと予測した)と発見したが、検測により、目的遺伝子の発現はすでに妨害された。
現在、イントロンに対する認知度が低い。出来るだけ他の遺伝子の機能に影響しないように、弊社はノックアウトプランを設計する原則は目的遺伝子のキーエンコーディング領域をノックアウトすることであり、目的遺伝子を排除されればいい。ノックアウト遺伝子断片が大きいほど良いわけではない。現在、CRISPR/Cas9技術を用いて、大きな断片遺伝子のノックアウトを行うのは難しくなく、サイヤジェンは既に400kb以上のノックアウト断片のマウスモデルをいくつか作製しました。このような大きな断片遺伝子ノックアウトプロジェクトは通常つながっている一つの遺伝子ファミリーの複数の遺伝子を同時にノックアウトする必要であり、あるいはノックアウトする目的遺伝子自体の断片が非常に長い。しかし、マウスモデルの安全性と有効性に基づいて、ほとんどの項目に対して、一般的にノックアウト断片は2kb程度であることが提案します。
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