ノックアウト細胞株

遺伝子機能を研究する時、ノックアウト（Knock out、KO）は遺伝子loss of functionを実現する重要なコントロール方式である。伝統的な遺伝子干渉（RNAi）技術に比べて、遺伝子ノックアウトは目的遺伝子の発現を完全に除去し、最後にタンパク質が全く発現しないか機能が完全に失い、細胞の表現型の変化をより良く観察することができる。

しかし、ノックアウト細胞モデルの構築過程が煩雑で、長い実験周期が必要である。経験が豊富ではない研究者に対して、3、4ヶ月で最後に効果が徹底していない場合が現れやすく、研究の進度が妨げられる。

サイヤジェン株式会社の細胞ノックアウトサービス 

サイヤジェン株式会社は人工知能に基づくAlphaKnockout遺伝子編集専門家システムとCRISPR/Cas9技術を最適化してアップグレードし、遺伝子編集効率のもっと高いSmart-CRISPR™システムを開発しました。簡単に細胞コード変更突然変異、フラグメントノックアウト、複数遺伝子ノックアウトなどのさまざまなノックアウト策略を実現し、タンパク残存発現の問題をより良く解決することができます。過去の1,000例以上のサービス経験に基づいて、我々は通常、細胞の完全なKO周期を7-12週間に制御することができて、それによってお客様がスムーズな引き続いての研究を行うことができます。

弊社の強み：

1. 多種類のノックアウト策略

お客様の遺伝子と細胞の情報によって、最適なノックアウト策略を採用し、目的遺伝子のノックアウトの成功率とタンパクの非発現効率を大幅に高めます。

2. 周期を更に短縮

サイヤジェン株式会社は全面的に細胞Smart-CRISPR™遺伝子編集システムをアップグレードし、KO実験の各流れを十分に最適化し、実験結果を確保することを前提として、最も早い納期を達成します。

3. 詳細な結果を提出 

成功に作製したKOホモ細胞系を提供するだけでなく、お客様の要求に応じて、ヘテロ接合体、陰性クローンなどの複数の異なるクローンを提供することができます。納品前に、細胞は厳しい無菌検査と成長状況検査を行います。また、専門的な実験報告と品質検査報告も細胞と一緒に提出します。

細胞ノックアウトサービスのメリット

1. オリジナルSmart-CRISPR™技術:多種類のノックアウト策略は、遺伝子の編集効率が著しく向上し、タンパク質の不発現を最大程度に確保します。

2. 専門的なプロジェクト管理：24h以内に迅速に方案を出して、定期的にプロジェクトの進展をフィードバックします。博士チームの支持に基づいて、詳しい納品報告を提出します。

3. 厳しい品質管理システム：ダブル細菌、マイコプラズマなどの微生物を検査し、汚染がないことを100%確保します。ノックアウト効果を十分に鑑定します。

4. 豊富な成功経験：1,000例以上プロジェクトの成功事例、200種類を超える細胞系の成功事例、多くの文献引用があります。

5. 細胞から動物までの全体サービス方案：細胞遺伝子発現コントロール、細胞機能検証、マウス疾患モデルの設立から、表現型分析までのフルセットのサービスを提供します。

ノックアウト細胞の成功例の精選

細胞ノックアウト成功事例

プロジェクト名：ヒトHCT116細胞のPSME3ノックアウト（セグメントノックアウト） 

1、gRNAの設計：

gRNA部位1：ATACGCTACCTAACATGGCTGGG

gRNA部位2：CCAGCATGCAAAATACAATGGGG

2、プライマーの合成及びプラスミドの構築：

3、細胞へのトランスフェクション

まず最適な電気回転パラメータを決定し、そして電気回転の方式でベクターを細胞にトランスフェクションする。 

4、モノクローナル細胞を選別して培養する

5、PCR及び電気泳動：

同定策略の原理は以下の通りです。

6、シークエンシング：

ATAAACAGAGGATTTAAGACTTTTGTTATGTTTTAGACGC-del

1809bp--AGTGGCTAATGCCT GTAATCC CACCACTTTGGGAGGCCAA

7、クローン状態：

細胞検査結果：無菌、マイコプラズマがない

培養システム：McCoy‘s 5A+ 10% FBS + 500μg/mL Hygromycin、1:3継代