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PiggyBac トランスジェニックマウス胚
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PiggyBacトランスポゾンのメカニズム ● トランスポゾン (または転移配列) – ゲノムの別の場所にDNAの小さな断片を転移・挿入 ● PiggyBac- ベクターと染色体の間を「カット＆ペースト」のメカニズムを利用して、効率的に転移する移動性遺伝子エレメント ● Pbase – ベクター上のITRを認識し、導入遺伝子を移動させてTTAA部位に取り込む
◆ PiggyBac トランスジェニックストラテジーデザイン
PiggyBacトランスジェニックマウス胚プロジェクトは、以下の段階に分かれています。
1. PiggyBac トランスジェニックストラテジーデザイン
- PiggyBac トランスジェニックストラテジーのデザイン
- ファウンダースクリーニングのためのPCRジェノタイピグストラテジーの作成
2. PiggyBac トランスジェニックベクターの構築
- PiggyBac プラスミドを用いたトランスジェニックベクターの構築
- Confirm the constructed PiggyBacを用いたトランスジェニックベクターを必要に応じてシークエンシングと制限酵素切断によって確認
3. PiggyBac トランスジェニック前核インジェクション
- PiggyBacトランスジェニックプラスミドを受精卵の前核にインジェクション
- 代理母へ受精卵を移植し、子孫を獲得
4. PiggyBac トランスジェニックマウス スクリーニング
-ご希望の胚期に獲得した胚を、PCRで遺伝子型判定lacZ染色を行い、PiggyBac導入遺伝子を有しているか同定を行う