遺伝子組み換え、ノックアウト、ノックイン、ヒト化とその他の遺伝子改変動物を大量に製作と使用されるにつれて、これらの重要な動物モデルを保存するのに大量の人力、資金とスペースが必要です。

凍結保存技術は科学研究者に高価な費用をかけずに動物モデルの核心個体群を維持する方法を提供しました。また、凍結保存技術は他にも多くの利点があります。例えば、貴重な動物モデルが微生物に汚染されるのを避けることができます。火災、洪水と地震などの自然災害による壊滅的な打撃を避けることができます。もっと重要なのは、ある品系に対して、動物世代の増加による遺伝子停止或いは発現改変のリスクを防止することができます。生きた動物の国際輸送に比べて、凍結した精子、胚または卵巣を輸送するコストとリスクはもっと安いです。

サイヤジェン株式会社はマウスの胚と精子の凍結保存サービスを提供します。お客様の資源の安全を確保するだけではなく、お客様が凍結保存しているソース資源を使われるとなると、最短で4～6週間で凍結保存している動物資源が得られます。

(一）胚の凍結保存

胚の凍結は最も早く、最も安全な実験動物品系を保存する方法です。胚のソースは過剰排卵の後で交配させることで得られ、体外受精（IVF）でも得られます。

胚の凍結保存の成功に影響する3つの重要な点は：

①凍結する胚の数量

②蘇生後の活着した胚の数量

③胚移植後に活着した成年動物の数量

凍結保存の提案：

品系ごとに二細胞期の胚を約300個凍結し、試験管ごとに胚を20～30個入れて液体窒素に入れて保存することをお薦めます。胚の凍結期間に、お客様の実験ニーズに応じて胚の蘇生サービスを提供致します。

胚の凍結保存技術の流れ：

• 胚の採集：二細胞期の胚を凍結保存するのをお薦めます。
• 胚の洗浄：微生物汚染を防止するために、国際胚移植学会の提案を採用して洗浄します。
• 胚の凍結保存：透化凍結を採用します。凍結液が標準的な手順で処理された後で液体窒素に入れて保存します。
• 蘇生検証：一週間凍結した後で試験管を1-2枚取って、その中の胚を蘇生します。胞胚発育率が50％以上なら、もしくは胚を移植された後でマウスが出産すれば、胚の凍結保存が成功しました。
• 長期保存：成功に保存された品系は専用の胚保存液体窒素缶に入れて長期に保存します。

サービス内容：

お客様が遺伝子組み換えやノックアウトを行われたオスマウスを提供していただきます。弊社がこのマウスを過剰排卵のメスマウスと交配またはIVFさせて、二細胞期の胚を取って、透化凍結保存方法で胚を凍結保存し、液体窒素に保存します。

技術指標：

お客様は6-10匹の12週齢から6ヵ月齢のオスマウス（遺伝子組み換え陽性マウスまたは遺伝子ノックアウトヘテロ接合体/ホモ接合体オスマウス）と遺伝子改変マウスを同定するプライマー及び条件を提供していただきます。弊社がマウスの遺伝子型を再検査（PCR方法）して、過剰排卵した4-6週齢のメスマウスと交配させ、もしくはIVFされて二細胞期の胚を取ります。品系ごとに二細胞期の胚を300個凍結保存します。

（二）精子の凍結保存

精子の凍結保存はソース保存サービスで広く応用されています。技術が成熟していて、コストが低く、操作しやすいという利点があります。無菌手術によって、オスマウスの副睾丸を分離し、特定の溶液で精子の遊離を行い、縁にある活力が最も良い精子を採集し、専用の凍結保護液を加えて、ストロー/凍結保存管に入れて液体窒素に保存します。

品系ごとに少なくとも3匹の12周齢から6ヵ月齢までの生殖可能な成年オスマウスを提供し、精液を10-20ストロー/凍結保存管冻存すると提案します。

利点:

• しばらく不要な品系を保存します。
• 遺伝的変化を減少し、自発的な突然変異による遺伝的改変を防止します。
• 貴重なマウス品系は病気や天災、人災によって大きな損失をもたらさないことを保証します。

（三）胚と精子の蘇生サービス

サービス内容：

お客様が必要な時、凍結保存した胚や精子を蘇生して得た胚をSPF級の偽妊娠のマウス受容体に移植し、SPF級の後世を得ます。外来の胚（精子）は凍結方法または蘇生方法を提供する必要があります。

技術指標：

弊社が保存している胚（精子）が蘇生した後、SPF級の遺伝子組み換え陽性マウス2匹またはノックアウトヘテロ接合体マウスを提供致します。雌雄は不問です。お客様が提供された凍結胚を蘇生した後、出産したすべてのマウスはお客様に提供致します。

お客様に関する鑑定報告書を提供することができます。

サービス周期：

9-12週間以内に完成します。